线粒体细胞外裂解规律及环孢霉素A对其抑制作用的实验研究

目的:观察线粒体细胞外裂解规律及环孢霉素A (cyclosporine A,CsA)对其抑制作用,探讨创伤后SIRS的发病机制与缓解策略。方法:选取10只60～70日龄,体重240～280 g的雄性SD大鼠,用于细胞线粒体的分离。新鲜分离大鼠线粒体随机分为2组,分别在添加或不添加CsA的血浆环境下培养8 h,每30 min通过ELISA方法检测培养液中线粒体特征性蛋白COX、MDH浓度。大鼠NR8383巨噬细胞系随机分为6组,对照组(A组):常规培养液培养;NR8383+CsA共培养组(B组):培养液中含10 mmol/L CsA;NR8383+完整线粒体共培养组(C组):培养液中添加完整线粒体(mtDNA=5 μg/ml);NR8383+完整线粒体+CsA共培养组(D组):培养液中添加完整线粒体(mtDNA=5 μg/ml)与10 mmol/L CsA;NR8383+裂解线粒体共培养组(E组):培养液中添加裂解的线粒体(mtDNA=5 μg/ml);NR8383+裂解线粒体+CsA共培养组(F组):培养液中添加裂解线粒体(mtDNA=5 μg/ml)与10 mmol/L CsA.在培养1、3和 5 h时,通过ELISA方法检测上清中TNF-α及IL-6的浓度。结果:在线粒体血浆培养中,MDH与COX水平随时间延长而升高,并在3 h与3.5 h时达到峰值,而CsA使其峰值均延迟到4.5 h;在巨噬细胞不同培养条件下,A组与B组的TNF-α与IL-6在不同时间点基本稳定,其他组间TNF-α与IL-6存在差异。培养1 h时,与C组比较,D组 的TNF-α与IL-6无显着差异,E组TNF-α与 IL-6显着增高;培养3 h时,与C组相比,D 组的TNF-α及 IL-6水平均显着降低,E组TNF-α与 IL-6水平显着增高;培养5 h时,与C组相比,D组TNF-α及 IL-6水平仍显着降低,E组TNF-α与IL-6无显着变化。F组与E组的TNF-α与IL-6水平无显着差异。结论:线粒体在血浆中随时间而逐渐裂解,进一步激活巨噬细胞,CsA对线粒体的裂解具有抑制作用,从而抑制其对巨噬细胞的激活效应。